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摘要：球虫病是我国养鸡生产中常见且危害十分严重的原虫病。目前，每年因鸡球虫病产生的药费约占鸡常见疾病防治费用的25%，对我国养鸡业造成巨大的经济损失。随着球虫耐药性的普遍发生，抗球虫药对生态环境的污染以及药物残留问题备受关注，而药物治疗手段越来越有限，选择疫苗预防鸡球虫病逐渐成为主流。
关键词：鸡球虫病;疫苗;接种方法;免疫效果
中图分类号：S858.31
文献标识码：B
doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.05.001
0引言
球虫疫苗不同的免疫接种方法会影响免疫效果，常见的包括滴眼、滴口、喷雾、拌料以及饮水等接种方法。其中饮水、拌料是目前大部分鸡场常用的接种方式，其操作简单、应激小，但在规模化养殖情况下，人工的工作量较少。气雾法免疫可做到流水线式免疫，解放人手，方便快捷，但是国内研究相对较少，是否适合生产应用还有待研究[1]。
1試验材料与方法
1.1材料
1日龄无球虫感染的黄羽肉鸡，购自广东省农业科学院畜牧研究所种鸡场，隔离饲养于经火焰消毒的鸡笼，饮用洁净自来水，饲养至试验日龄时备用;添加抗球虫药物和抗生素的全价饲料;球虫病四价活疫苗，攻虫用强毒卵囊（嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫）;盐水溶液：氯化钠380g，蒸馏水1000mL，加热溶解，比重为1.18。
生物显微镜、麦克马斯特计数板（规格10计数板）、电子称、金属底座计数器、喷雾机、料筒、水壶、60目金属网筛、烧杯、乳胶头滴管、手持喷雾器等。
1.2方法
1.2.1不同日龄饮水免疫试验分组及处理
取1日龄黄鸡20只作为饮水免疫1组;取4日龄黄鸡20只作为饮水免疫2组;饮水免疫组分别在1日龄和4日龄进行鸡球虫病四价活疫苗饮水免疫，1羽份/鸡，每组采取地上平养。其具体步骤如下。
取6L饮用水，再倒入1瓶1000羽份/瓶球虫活疫苗，加入疫苗助悬剂，充分混匀，然后准确量取120mL分装到饮水器中，供20羽鸡自由饮用4-5h，免疫前不停水。
1.2.2喷雾免疫试验分组及处理
（1）口服免疫：直接将疫苗稀释好1羽份接种。
（2）喷雾免疫：将疫苗与水按1：9、1：19稀释，搅拌均匀，将2种稀释好的疫苗分别装入喷雾机，把装有试验雏鸡的纸箱放入喷雾罩内，进行喷雾免疫（通过鸡的啄羽行为，把粘在羽毛上面的疫苗啄食进体内）。
1.2.3不同接种方法免疫试验分组及处理
第1组为对照组，第2组喷雾免疫将疫苗与水按1：19稀释，搅拌均匀，将稀释疫苗装入喷雾机，把装有试验雏鸡的纸箱放入喷雾罩内，进行喷雾免疫;第3组拌料免疫取1瓶1000羽份/瓶球虫活疫苗倒入0.4L水中，加入0.2g食品红，搅拌均匀，稀释好后装入手持喷雾器中，再称取4kg饲料，将疫苗喷洒到饲料上，边喷雾边搅拌饲料，准确称取70g饲料分装到料盘中供70羽鸡自由采食;第4组饮水免疫取6L饮用水，再倒入1瓶1000羽份/瓶的球虫活疫苗，加入疫苗助悬剂，充分混匀，然后准确量取42 mL分装到饮水器中，供70羽鸡自由饮用4-5h，免疫前不停水[2]。
1.2.4免疫试验观察项目
（1）临床观察，记录各组鸡只精神、毛色、食欲和粪便等情况。
（2）免疫均匀性，每组分别于免疫后6d随机取10只鸡的粪便，用饱和盐水漂浮单独检测每只鸡的小肠粪和盲肠粪的卵囊检出率。
（3）卵囊OPG值，免疫组4-21d，每组每天取小肠粪和盲肠粪，按4：1的比例混合后，用麦氏计数法计粪便的卵囊OPG值。
2结果
2.1攻虫期间鸡的增重情况
统计鸡在攻虫前和攻虫后阴性对照组、阳性对照组、喷雾免疫组、拌料免疫组、饮水免疫组的增重情况，计算各组鸡的相对增重率。见表1、图1。
试验用柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球虫的混合株，其剂量分别为10万、3万、3万、7万个卵囊。3种免疫途径接种鸡球虫病四价活疫苗均对鸡产生了免疫保护效果，而拌料和饮水免疫方法的效果比较好，喷雾免疫方法的保护效果一般。
2.2攻虫期间各组鸡存活率
攻虫后第6天，对各组试验鸡粪便进行观察，并记录血便情况，其中阳性组血便最严重，其次为喷雾免疫组，饮水免疫组和拌料免疫组有少量血便。
攻虫第6天，观察各组试验鸡的精神状态、血便情况，并记录各组鸡的死亡情况，见表2。
攻虫第6天，阳性组鸡精神沉郁、羽毛蓬乱、消瘦、排血便，其死亡率为12.5%，而喷雾免疫组、拌料免疫组和饮水免疫组鸡的状态活泼、羽毛比较光滑，血便比较少，其死亡率为0。各组试验鸡的死亡率和精神状态说明了各种免疫方法均能对小鸡产生一定的保护力。
3讨论
3.1不同日龄接种疫苗的效果分析
从攻虫后各组鸡的增重对比分析，强毒株球虫对阳性对照组、1日龄免疫组、4日龄免疫组的增重均有部分影响，但2个免疫组鸡相对增重率显著高于阳性对照组，这表明球虫疫苗产生了免疫保护效果。在攻虫后的肠道各段病变情况和血便情况分析中也体现出1日龄免疫组和4日龄免疫组均能产生有效免疫保护，说明1日龄和4日龄免疫球虫活疫苗均能产生免疫保护效果。试验结果：鸡在1日龄时接种鸡球虫病四价活疫苗，能产生良好的免疫保护效果，与4日龄接种鸡球虫病四价活疫苗的免疫效果无明显差别，在1日龄时接种鸡球虫病四价活疫苗可行。
3.2喷雾免疫接种不同稀释量效果分析
在喷雾免疫不同稀释量的试验中，从疫苗与水1：9的喷雾免疫1组和疫苗与水1：19喷雾免疫2组进行免疫接种后第5-7天排泄卵囊情况分析，喷雾免疫2组鸡的卵囊各种卵囊的相对比例和总卵囊的相对比例均高于免疫1组。这表明将疫苗与水进行1：19稀释的浓度使用时将会有更多的卵囊进入鸡体内。喷洒更多的雾剂可减缓水分蒸发速度，卵囊能在雾剂中长时间保持活性。雾剂中高浓度的卵囊可增加鸡单次啄食进入鸡体内的卵囊量，但鸡身上的雾剂过少会使水分很容易蒸发，卵囊逐渐会因十燥而死亡[3]。除调整浓度外，在雾剂中加入有颜色的染料或许对于其免疫接种效果更好，据研究表明，鸡对红色敏感，在疫苗中加入红色的染料后，90%-95%鸡会被羽毛上疫苗雾剂中的红色染料吸引，其后鸡便会啄食自身或其他鸡羽毛上的疫苗雾剂。试验结果表明，疫苗与水1：19稀释进行喷雾免疫的接种效果稍好。
4结束语
研究通过分析攻虫前后增重情况、临床观察与攻虫后肠道各段病变情况，证明3种免疫方法接种鸡球虫病四价活疫苗均可对鸡产生免疫保护力。饮水免疫和拌料免疫的临床效果均好于喷雾免疫方法，但这2种免疫方法效果差别不大，喷雾免疫效果最差。
参考文献
[1]陈敬昌.鸡球卵囊囊排出动态及球虫病免疫防制探讨[D].广州：华南农业大学，2005.
[2]邓雯，马彦博，刘玉梅.鸡球虫对机体的致病作用研究进展[J].家畜生态，2004，6（2）：59-62.
[3]段嘉树.鸡球虫病免疫：I.球虫病特点和免疫原理[J].中国动物保健，2004，3（4）：7-12.
作者简介：沈国聪（1985-），男，硕士，研究方向：兽医学。